یافتن شرایط بهینه برای رشد و تكثیر مخمر، جلسه دوم

مراحل انجام آزمایش

برای شروع لازم است که مواد و وسایل مورد نیاز برای این آزمایش را فراهم کنید. مهم ترین ماده مورد نیاز مخمر نانوایی است که همانطور که از اسم آن پیداست می توانید از نانوایی ها و مراکز فروش تحهیزات شیرینی فروشی تهیه کنید.

یافتن شرایط بهینه برای رشد و تكثیر مخمر،جلسه دوم

وسایل مورد نیاز

- مخمر نانوایی (مایه خمیر)

- گلوكز، فروكتوز ،شكر، نشاسته، آرد، ‌گلیسرین

- حمام آب 40 درجه

- بشر ، لوله آزمایش، جا لوله ‌ای

- چوب پنبه سوراخ دار به اندازه قطر لوله‌‌ آزمایش

- شلنگ انعطاف ‌پذیر به اندازه قطر سوراخ چوب پنبه

- استوانه مدرج

- لام و لامل

- لام نئوبار

- سرنگ انسولین

- میكروسكوپ

- متیلن بلو

- اكسید كلسیم

- معرف تورنسل

مراحل انجام پروژه

مرحله اول: زنده كردن مخمر ومشاهده زیر میكروسكوپ

حداقل شرایطی كه برای زنده كردن مخمر لازم است‌، آب‌، ماده غذایی و دمایی بین 30 تا 40 درجه سانتی ‌گراد.

1- 4 لوله آزمایش آماده كرده و در هر یك 5/0 گرم مخمر خشك بریزید.

2- به دو لوله اول 2 گرم شكر اضافه نمایید.

3- به یكی از لوله ‌های شكردار و یك لوله بدون شكر آب 40 درجه و به دو لوله باقی ‌مانده آب سرد اضافه نمایید.

4- هر 5 دقیقه یكبار لوله ‌ها را بررسی و مشاهدات خود را تا زمان 30 دقیقه یادداشت نمایید.

5- بعد از زمان طی شده‌،‌ 1 میلی ‌لیتر از محتویات لوله اول را داخل لوله تمیزی بریزید و به آن چند قطره متیلن بلو اضافه نمایید. یك قطره از محلول فوق را در زیر میكروسكوپ بررسی نمایید. نتایج بدست آمده از عدسی با بزرگنمایی 40 را یادداشت نموده و سعی كنید تصویر واضحی از آنچه كه می ‌بینید را بكشید. همچنین می‌توانید با استفاده از دوربین موبایل یا دوربین دیجیتال از تصویر دیده شده عكس بگیرید.

6- همین كار را با سه لوله دیگر نیز انجام داده و نتایج لوله ‌ها را با هم مقایسه نمایید.

مرحله دوم: در هر گرم پودر مخمر چند سلول وجود دارد؟

1- 5/0 گرم از پودر مخمر را به همراه 1 گرم شكر و 25 میلی ‌لیتر آب ولرم در بشری بریزید.

2- مواد را به خوبی مخلوط كنید تا محلول كاملا یكنواخت گردد.

3- محلول فوق را به استوانه مدرج منتقل نمایید و با آب مقطر حجم محتویات آن را به 100 برسانید.

4- 1 میلی ‌لیتر از محلول را داخل لوله تمیزی بریزید و به آن چند قطره متیلن بلو اضافه نمایید و 1/0 میلی‌لیتر از آن را (‌از سرنگ انسولین برای اندازه گیری این حجم استفاده كنید) بر روی لام نئوبار قرار دهید‌.

5- لامل را با دقت روی لام قرار داده و زیر میكروسكوپ مشاهده نمایید. اگر سلول‌ ها به هم چسبیده و بر روی هم قرار داشتند، ‌محلول مخمر را 10 برابر رقیق نمایید، در غیر اینصورت میكروسكوپ را در بزرگنمایی 40 برابر تنظیم نموده و سلول‌ های قرار گرفته در چهار مربع كناری را در یكی از مستطیل‌ها بشمارید و جدول مربوطه را در قسمت نتایح كامل كنید.

جعبه ابزار زیستی

روش استفاده از لام نئوبار

لامل را روی لام نئوبار قرار داده و از كنار هر دو قسمت مستطیلی، محلول را زیر لامل تزریق كنید. دقت کنید که تزریق به آرامی باید انجام شود. بعد از تزریق مقدار كمی محلول صبر كنید تا بواسطه خاصیت موئینگی مایع در زیر لامل پخش شود. تا پر شدن كامل سطح این كار را با دقت ادامه دهید و با توجه به شكل زیر سلو‌ل ‌ها را شمارش نمایید. برای این کار لازم است تمام سلول های 4 مربع کناری که با A, B ,C و D مشخص شده اند را بشمارید. در شمردن دقت لازم را به عمل آورید. مثلا از یک سمت شمارش را آغاز کرده و در یک مسیر مشخص ادامه دهید. دقت کنید مرز هر یک از مربع ها با یک خط مشخص شد است که سلولهای قرار گرفته روی خط نباید شمارش شود. حجم محلولی که روی هز یک از مربعها قرار می گیرد دقیقا 0.0001 میلی لیتر است. بعد شمارش هر چهار مربع از اعداد به دست آمده میانگین گیری می شود. سپس با تناسب تعداد سلولها را در حجم اولیه باید تخمین بزنید.

مرحله سوم: مشاهده جوانه زدن مخمر زیر میكروسكوپ

1- در بشر با حجم 250 میلی ‌لیتر 1 گرم مخمر خشك و 3 گرم شكر بریزید.

2- 50 میلی ‌لیتر آب ولرم به آن اضافه نمایید و مواد را به خوبی با هم مخلوط كنید.

3- بشر را در جای نسبتاً گرمی قرار دهید و هر دو ساعت یكبار، یك قطره از محلول را روی لام قرار داده و بعد از لامل گذاری وضعیت مخمرها را زیر میكروسكوپ بررسی كنید.

4- برای مشاهده جوانه زدن مخمر، لازم است از عدسی با بزرگنمایی 100 استفاده نمایید، بدین منظور بعد از واضح شدن تصویر در بزرگنمایی 40، بر روی لامل یك قطره روغن ایمرسیون بریزید و با استفاده از پیچ تنظیم ظریف صفحه نمونه را به آرامی به عدسی‌ها نزدیك نمایید تا تصویر واضح گردد.

5- با استفاده از پیچ‌ های صفحه نمونه، كل سطح لامل را برای مشاهده سلول ‌های در حال جوانه‌ زدن جستجو نمایید.